TGuide FFPE DNA-eenstapskit

A-1 Lage concentratie cellen of virussen in het uitgangsmonster — Verrijk de concentratie cellen of virussen.

A-2 Onvoldoende lysis van de monsters — De monsters zijn niet grondig gemengd met de lysisbuffer. Er wordt voorgesteld om grondig te mengen door 1-2 keer pulserend te vortexen. —Onvoldoende cellysis veroorzaakt door de activiteitsafname van proteïnase K. —Onvoldoende cellysis of eiwitafbraak als gevolg van onvoldoende warmbadtijd. Er wordt voorgesteld om het weefsel in kleine stukjes te snijden en de badtijd te verlengen om al het residu in het lysaat te verwijderen.

A-3 Onvoldoende DNA-adsorptie. -Er werd geen ethanol of een laag percentage in plaats van 100% ethanol toegevoegd voordat het lysaat naar de spinkolom werd overgebracht.

A-4 De pH-waarde van de elutiebuffer is te laag. —Pas de pH aan tussen 8,0-8,3.

Resterende ethanol in het eluens.

—Er is resterende wasbuffer PW in het eluens. De ethanol kan worden verwijderd door de spinkolom gedurende 3-5 minuten te centrifugeren en vervolgens gedurende 1-2 minuten bij kamertemperatuur of 50 incubator te plaatsen.

A-1 Het monster is niet vers. —Extract een positief DNA-monster als controle om te bepalen of het DNA in het monster is afgebroken.

A-2 Onjuiste voorbehandeling. —Veroorzaakt door overmatig malen van vloeibare stikstof, het terugwinnen van vocht of een te grote hoeveelheid van het monster.

De voorbehandelingen moeten variëren voor verschillende monsters. Zorg ervoor dat u bij plantenmonsters grondig vermaalt in vloeibare stikstof. Voor dierlijke monsters, homogeniseren of grondig vermalen in vloeibare stikstof. Voor monsters met moeilijk te breken celwanden, zoals G+-bacteriën en gist, wordt aangeraden om lysozym, lyticase of mechanische methoden te gebruiken om de celwanden te breken.

4992201/4992202 Plant Genomic DNA Kit gebruikt een kolomgebaseerde methode waarvoor chloroform nodig is voor de extractie. Het is vooral geschikt voor verschillende plantenmonsters, maar ook voor droog plantenpoeder. Hi-DNAsecure Plant Kit is ook kolomgebaseerd, maar zonder extractie van fenol/chloroform, waardoor het veilig en niet-toxisch is. Het is geschikt voor planten met een hoog gehalte aan polysachariden en polyfenolen. 4992709/4992710 DNAquick Plant System gebruikt een op vloeistof gebaseerde methode. Fenol / chloroform-extractie is ook niet nodig. De zuiveringsprocedure is eenvoudig en snel zonder limiet voor de starthoeveelheden van het monster, zodat gebruikers de hoeveelheid flexibel kunnen aanpassen aan de experimentele vereisten. Grote gDNA-fragmenten kunnen worden verkregen met een hoge opbrengst.

Het genomische DNA werd geëxtraheerd uit verschillende volumes menselijke volbloedmonsters door de TIANamp Blood DNA Kit. De resultaten zijn als volgt. De resultaten worden alleen als referentie vermeld, de werkelijke extractieresultaten zijn afhankelijk van de omstandigheden van de monsters.

De bloedstolsel-DNA-extractie kan worden uitgevoerd met behulp van de reagentia die in deze twee kits worden geleverd door eenvoudig het protocol te wijzigen in de specifieke instructie voor de bloedstolsel-DNA-extractie. De zachte kopie van het bloedstolsel-DNA-extractieprotocol kan op verzoek worden verstrekt.

Suspendeer het verse monster met 1 ml PBS, normale zoutoplossing of TE-buffer. Homogeniseer het monster volledig door een homogenisator en verzamel het neerslag naar de bodem van een buis door te centrifugeren. Gooi het supernatant weg en resuspendeer het neerslag met 200 ul buffer GA. De volgende DNA-zuivering kan worden uitgevoerd volgens de instructie.

Voor de zuivering van gDNA in plasma-, serum- en lichaamsvloeistofmonsters wordt de TIANamp Micro DNA Kit aanbevolen. Voor de zuivering van virus-gDNA uit serum/plasmamonsters wordt de TIANamp Virus DNA/RNA Kit aanbevolen. Voor de zuivering van bacterieel gDNA uit serum- en plasmamonsters wordt de TIANamp Bacteria DNA Kit aanbevolen (lysozyme moet worden opgenomen voor positieve bacteriën). Voor speekselmonsters worden Hi-Swab DNA Kit en TIANamp Bacteria DNA Kit aanbevolen.

DNAsecure Plant Kit of DNAquick Plant System worden aanbevolen voor extractie van het schimmelgenoom. Voor extractie van het gistgenoom wordt de TIANamp Yeast DNA Kit aanbevolen (lyticase moet zelf worden bereid).